Pag -iingat para sa polyacrylamide gel electrophoresis

· PolyacrylamideAng gel ay dapat sa pamamagitan ng acrylamide monomer, polymerization panimulang materyal, katalista, at ang kanan ng pinaghalong asin at buffer.

· Acrylamideat bis (n, n '- methylene double acrylamide) ay ang monomer form gel matrix.

· Ang ammonium persulfate ay nagsisimula ng malagkit na proseso ng polymerization. Ang pagbabalangkas ng pandikit ay nangangailangan ng 10% na solusyon ng ammonium persulfate na inihanda sa tubig. Karamihan sa impormasyon ay nagpapahiwatig ng pangangailangan para sa aktibong paggamit. Gayunpaman, ang 10% na solusyon ay maaaring mailagay sa 4 ℃ para sa ilang linggo nang walang makabuluhang pagkawala ng aktibidad. Gumawa ng hanggang sa 10 ml at itapon kapag ang pandikit ay nabigo na mag -iipon.

Tip: Ang porsyento ngAcrylamideSa pagkakasunud -sunod ng pandikit at pandikit ng protina ay hindi pareho. Kung gumagamit ng premade acrylamide: BIS solution, tiyaking makuha ang tamang bote.

· TEMED (n, n, n ', n'- tetramethyl ethylenediamine) ay isang katalista, sa isang brown na bote, na inilagay sa ref. Idagdag pa bago ibuhos ang pandikit.

· Ang polyacrylamide electrophoresis na ginamit na baso sa electrophoresis ay dapat hugasan bago at pagkatapos ng bawat oras. Pagkatapos ng electrophoresis, hugasan ng isang malambot na brush at tela sa mainit na tubig na sabon, banlawan ng distilled water at tumayo upang matuyo.

· Ang kahalumigmigan at alikabok ay maaaring maging sanhi ng guwang na polimer. Bago ang electrophoresis, linisin ang salamin na plato na may mas malinis na salamin at punasan ito ng isang malambot na brush. Hugasan gamit ang distilled water at matuyo nang lubusan gamit ang isang punasan ng papel. Ang paglabas ng 70% ethanol bago ang pagpahid ng papel ay nakakatulong upang linisin at mapabilis ang pagpapatayo. Magdagdag ng mga halimbawa ng acrylamide na sunud -sunod: bis, tubig, solusyon sa buffer, ammonium persulfate, temed. Umiling nang maayos at ibuhos kaagad.

Hindi kinakailangan na mabulok ang polyacrylamide bago ang polymerization. (Ang Acrylamide na ginamit upang mailagay sa isang vacuum upang alisin ang mga bula dahil pinipigilan ng oxygen ang polymerization.)

Pahalang na mga tip sa sample ng Glue Point.

· Maglagay ng isang piraso ng itim na papel sa ilalim na kahon, itim na background upang makagawa ng ilang hole hole upang makita nang mas malinaw.
· Ang tanke ng pandikit na puno ng buffer, sa ibabaw lamang ng colloid.
· Kung ang gilid ay may ilaw, i -on ang mga ilaw, hayaan ang ilaw na kumikinang. Iguhit ang sample sa pipette.
· Paggamit ng awtomatikong aparato ng pipetting.
· Sa 10-200 mu 1 likidong paglipat ng punto ay maaaring magamit sa karamihan ng mga puntos sa sample. Para sa napakaliit na mga butas ng sample (mas mababa sa 10μ1), ang mahabang ulo ng pipette na ginamit para sa pagkakasunud -sunod na pandikit ay mas maginhawa.

· Ang pipetting ay nalubog lamang sa sample, inhaling dahan -dahang paglipat ng likido. Ang sample ay maaaring lumitaw na malagkit na may gliserin, at ang mabilis na pumping ay maaaring gumuhit ng mga bula ng hangin sa ulo ng pipette.

· Ang mga halimbawa pagkatapos ng paglanghap ng ulo ng pipetting, ay ililipat ang likidong ulo ng malumanay sa gilid ng pipe o pagpahid ng papel na pagsuso ng likidong ulo sa labas ng mga droplet. Mag -ingat na huwag pagsuso ang sample.

Ilagay ang sample sa hole hole

· Pipetting aparato upang mapanatili ang isang maliit na presyon, gawin ang mga sample na bahagyang ilipat ang overflow likidong ulo.
· Ang ulo ng pipetting na nakapasok sa buffer, bahagyang mas mataas kaysa sa mga butas ng lugar, mapanatili ang positibong presyon. Ang dulo ng pipette ay maaaring maipasok sa isang maliit na butas.
· Dahan -dahan at tuluy -tuloy ang mga sample. Ang tip ng pipette ay inilalagay sa itaas ng butas ng sample ng point, at ang sample ay lumulubog sa butas. Hayaan ang sample na lababo upang punan ang hole hole sa halip na itulak.
· Kapag ang huling pagbagsak ng sample na may likidong ulo, ang likido ay lilipat sa ikalawang binti, dahan -dahang itaas ang likidong paglipat, lumipat sa buffer

Paano gawin ang vertical glue sampling?

· Vertical glue point sample hole na nabuo sa pagitan ng dalawang piraso ng baso. Sa napaka manipis na pandikit, ang ulo ng pipette ay hindi maaaring maipasok sa pagitan ng dalawang plato ng baso. Panoorin ang gliserin! Ilagay ang ulo ng pipette sa hole hole at ang sample ay lumulubog sa butas.
· Sample ng point bago, siguraduhing ilagay ang vertical point ng polypropylene acyl gel sample hole ay hugasan malinis. Hugasan ang unpolymerized acrylamide at ang tubig na maaaring lumitaw sa ilalim ng hole hole. Ang tubig ay maaaring gawing mas maliit ang hole hole. Gumamit ng isang 25ml o 50ml syringe at isang 18-gauge karayom. Ibuhos sa electrophoresis buffer at maingat na i -flush ang hole hole.
· Mahirap makita ang hole hole, ngunit sa pareho, madali ang natitira. Kung may labis na butas, ang sample buffer ay maaaring masuri na may asul na bromophenol.