Mga pag-iingat para sa polyacrylamide gel electrophoresis

· polyacrylamidegel ay dapat sa pamamagitan ng acrylamide monomer, polymerization panimulang materyal, katalista, at ang karapatan ng asin at buffer pinaghalong magkasama.

· acrylamideat BIS (N, N '- methylene double acrylamide) ay ang monomer form na gel matrix.

· ammonium persulfate simulan ang malagkit polimerisasyon proseso. Ang pagbabalangkas ng pandikit ay nangangailangan ng 10% ammonium persulfate solution na inihanda sa tubig. Karamihan sa impormasyon ay nagpapahiwatig ng pangangailangan para sa aktibong paggamit. Gayunpaman, ang 10% na solusyon ay maaaring ilagay sa 4 ℃ sa loob ng ilang linggo nang walang makabuluhang pagkawala ng aktibidad. Gumawa ng hanggang 10 ml at itapon kapag hindi napagsama-sama ang pandikit.

Tip: Ang porsyento ngacrylamidesa sequencing glue at protein glue ay hindi pareho. Kung gumagamit ng premade acrylamide: BIS solution, siguraduhing makuha ang tamang bote.

· Ang TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) ay isang katalista, sa isang brown na bote, na inilagay sa refrigerator. Idagdag bago magbuhos ng pandikit.

· Ang polyacrylamide electrophoresis na ginamit na salamin sa electrophoresis ay dapat hugasan bago at pagkatapos ng bawat oras. Pagkatapos ng electrophoresis, hugasan gamit ang isang malambot na brush at tela sa mainit na tubig na may sabon, banlawan ng distilled water at tumayo upang matuyo.

· Ang kahalumigmigan at alikabok ay maaaring maging sanhi ng hollow polymer. Bago ang electrophoresis, linisin ang glass plate gamit ang glass cleaner at punasan ito ng malambot na brush. Hugasan ng distilled water at patuyuin ng mabuti gamit ang papel na punasan. Ang pagbanlaw ng 70% ethanol bago punasan ng papel ay nakakatulong upang linisin at mapabilis ang pagkatuyo. Magdagdag ng mga sample ng acrylamide nang sunud-sunod: BIS, tubig, buffer solution, ammonium persulfate, TEMED. Iling mabuti at ibuhos kaagad.

Hindi kinakailangang i-degass ang polyacrylamide bago ang polymerization. (Dati inilalagay ang acrylamide sa isang vacuum upang alisin ang mga bula dahil pinipigilan ng oxygen ang polymerization.)

Pahalang na mga tip sa sample ng glue point.

· Maglagay ng isang piraso ng itim na papel sa ilalim na kahon, itim na background upang makagawa ng ilang sample hole upang makita nang mas malinaw.
· pandikit na tangke na puno ng buffer, sa ibabaw lamang ng colloid.
· kung may ilaw ang gilid, buksan ang mga ilaw, hayaang lumiwanag ang liwanag ng colloid. Iguhit ang sample sa pipette.
· gamit ang awtomatikong pipetting device.
· sa 10-200 mu 1 likidong gumagalaw na punto ay maaaring gamitin sa karamihan ng mga punto sa sample. Para sa napakaliit na sample na butas (mas mababa sa 10μ1), ang mahabang pipette head na ginagamit para sa sequencing glue ay mas maginhawa.

· Ang pipetting ay inilubog lamang sa sample, huminga ng mabagal na gumagalaw na likido. Ang sample ay maaaring mukhang malagkit na may gliserin, at ang mabilis na pagbomba ay maaaring maglabas ng mga bula ng hangin sa ulo ng pipette.

· Ang mga sample pagkatapos ng paglanghap ng pipetting head, ay dahan-dahang ililipat ang fluid head sa gilid ng pipe o pagpunas ng papel na sumisipsip ng likidong ulo sa labas ng droplets. Mag-ingat na huwag sipsipin ang sample.

Ilagay ang sample sa sample hole

· pipetting aparato upang panatilihin ang isang maliit na presyon, gawin ang mga sample bahagyang ilipat overflow likido ulo.
· Ang pipetting ulo na ipinasok sa buffer, bahagyang mas mataas kaysa sa mga butas sa lugar, mapanatili ang positibong presyon. Ang dulo ng pipette ay maaaring ipasok sa isang maliit na butas.
· dahan-dahan at tuluy-tuloy na lumabas ang mga sample. Ang pipette tip ay inilalagay sa itaas ng punto sample hole, at ang sample ay lulubog sa butas. Hayaang lumubog ang sample upang punan ang sample hole sa halip na itulak papasok.
· Sa sandaling ang huling patak ng sample na may likidong ulo, ang likido ay lilipat sa pangalawang binti, dahan-dahang itataas ang likidong paggalaw, lalabas sa buffer

Paano gumawa ng vertical glue sampling?

· vertical glue point sample na mga butas na nabuo sa pagitan ng dalawang piraso ng salamin. Sa napakanipis na pandikit, ang ulo ng pipette ay hindi maaaring maipasok sa pagitan ng dalawang plato ng salamin. Panoorin ang gliserin! Ilagay ang pipette head sa ibabaw ng sample hole at ang sample ay lulubog sa butas.
· point sample bago, siguraduhin na ilagay ang vertical point ng polypropylene acyl gel sample hole ay anglaw malinis. Hugasan ang unpolymerized acrylamide at ang tubig na maaaring lumabas sa ilalim ng sample hole. Maaaring gawing mas maliit ng tubig ang sample hole. Gumamit ng 25ml o 50ml syringe at isang 18-gauge na karayom. Ibuhos ang electrophoresis buffer at maingat na i-flush ang sample hole.
· maaaring mahirap makita ang sample hole, ngunit sa parehong paraan, ang iba ay madali. Kung mayroong labis na mga butas, ang sample buffer ay maaaring masuri gamit ang bromophenol blue.